مجموعة أنسجة الماوس PCR Direct

التضخيم السريع للجين المستهدف مباشرة من عينات الأنسجة الحيوانية بدون استخلاص.

تتبنى مجموعة Mouse Tissue Direct PCR Kit تصميمًا فريدًا للتغليف يتضمن جميع الكواشف لإعداد الحمض النووي الجيني السريع وتضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). إنه قابل للتطبيق على تنقية الحمض النووي للجينوم بخطوة واحدة من أنسجة الماوس (الذيل والأذن وأصابع القدم) وتضخيم واكتشاف PCR اللاحق. العملية برمتها لا تشمل التجانس ، التحطيم ، الهضم بين عشية وضحاها ، استخلاص المذيبات العضوية ، ترسيب الإيثانول أو خطوات تنقية العمود. يمكن الحصول على نتائج مستقرة من خلال عمليات بسيطة وسريعة.

2 × Dir PCR MasterMix الذي توفره هذه المجموعة هو كاشف PCR متوافق للغاية يمكنه تضخيم الحمض النووي بكفاءة وبشكل خاص دون الحاجة إلى إزالة الشوائب مثل البروتينات. يحتوي هذا الكاشف على جسم مضاد معدل بدء التشغيل الساخنطق بوليميريز DNA ، dNTPs ، MgCl₂، المخازن المؤقتة ، وكذلك المحسن والمحسن والمثبت لتفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل. يمكن إجراء تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل ببساطة عن طريق إضافة قالب مستخرج تقريبًا ومواد أولية محددة. العملية برمتها سريعة وبسيطة وحساسة ومحددة ومستقرة ، وهي مناسبة بشكل خاص للفحص عالي الإنتاجية. يحتوي 2 × Dir PCR MasterMix على صبغة تفريد سابقة الخلط ، بحيث يمكن إرسال منتجات PCR مباشرة للكشف عن الرحلان الكهربي بعد التفاعل. يحتوي الطرف 3 'من منتج PCR على ذيل A ، والذي يمكن استخدامه لاستنساخ TA.

قط. لا	حجم التعبئة
4992531	20 ميكرولتر × 50 rxn
4992532	20 ميكرولتر × 200 rxn

أرسل بريدًا إلكترونيًا إلينا

تفاصيل المنتج

سير العمل

مثال تجريبي

التعليمات

علامات المنتج

سمات

■ بسيط وسريع: يمكن استخراج الحمض النووي الجيني بسرعة من أنسجة الفأر في 60 دقيقة دون طحن النيتروجين السائل واستخلاص المذيبات العضوية.
■ تطبيق واسع: إنه مناسب لاستخراج الحمض النووي الجيني بخطوة واحدة من ذيل الفأر والأذن وأصابع القدم والأنسجة الأخرى.
■ خصوصية عالية: إن إنزيم Taq polymerase المستخدم في هذا المنتج هو إنزيم البدء الساخن المعدل من الجسم المضاد ، مع قالب عالي وتقارب التمهيدي وخصوصية التضخيم ، وهو مناسب بشكل خاص للتنميط الجيني والتعريف الجيني.
■ اكتشاف الجينات: المنتج سهل التشغيل مع نتائج موثوقة ، وهو مناسب بشكل خاص للتحليل عالي الإنتاجية والكشف عن أنسجة الماوس

يمكن تخصيص جميع المنتجات لـ ODM / OEM. للتفاصيل،الرجاء النقر فوق خدمة مخصصة (ODM / OEM)

سابق: مجموعة الدم المباشر PCR

التالي: مجموعة الطفرات السريعة الموجهة بالموقع

Experimental Example

استخدام Mouse Tissue Direct PCR Kit والمنتج ذي الصلة من المورد A لتضخيم شظايا 1000 bp و 2000 bp و 3000 bp من ذيل الماوس وأذن الماوس وذيل الفئران على التوالي. أظهرت النتيجة أن Mouse Tissue Direct PCR Kit تتمتع بخصوصية أفضل ومعدل نجاح أفضل.

س: لا نطاقات تضخيم

نموذج A-1

■ يحتوي القالب على شوائب بروتينية أو مثبطات Taq ، وما إلى ذلك - - تنقية قالب الحمض النووي ، وإزالة شوائب البروتين أو استخراج الحمض النووي باستخدام مجموعات التنقية.

■ لم يكتمل تمسخ القالب - - قم بزيادة درجة حرارة التمسخ بشكل مناسب وإطالة وقت التمسخ.

■ تدهور القالب - إعادة تجهيز القالب.

A-2 التمهيدي

■ نوعية رديئة من البرايمر - أعد تركيب البرايمر.

■ تحلل التمهيدي ——Aliquot الاشعال عالية التركيز إلى حجم صغير للحفظ. تجنب التجميد والذوبان المتكرر أو الاحتفاظ بالتبريد لمدة 4 درجات مئوية على المدى الطويل.

■ تصميم غير مناسب للبادئات (على سبيل المثال ، طول التمهيدي غير كافٍ ، يتكون ثنائي الطبقة بين البادئات ، وما إلى ذلك) - إعادة تصميم الاشعال (تجنب تشكيل ثنائي التمهيدي والبنية الثانوية)

أ -3 ملغ²⁺تركيز

■ ميغاغرام²⁺ تركيز منخفض للغاية - زيادة Mg بشكل صحيح²⁺التركيز: تحسين Mg²⁺ التركيز بسلسلة من التفاعلات من 1 مم إلى 3 مم بفاصل 0.5 ملي مولار لتحديد أفضل ملغ²⁺ التركيز لكل قالب وتمهيدي.

A-4 درجة حرارة التلدين

■ درجة حرارة التلدين المرتفعة تؤثر على ارتباط البرايمر والقالب. —— تقليل درجة حرارة التلدين وتحسين الحالة بتدرج 2 درجة مئوية.

A-5 تمديد الوقت

■ وقت تمديد قصير - - زيادة وقت التمديد.

س: خطأ إيجابي

الظواهر: تظهر العينات السلبية أيضًا نطاقات التسلسل المستهدفة.

A-1 تلوث PCR

■ التلوث المتبادل للتسلسل المستهدف أو منتجات التضخيم —— بحذر لا تقم بمص العينة التي تحتوي على تسلسل الهدف في العينة السلبية أو انسكابها خارج أنبوب جهاز الطرد المركزي. يجب تعقيم الكواشف أو المعدات للتخلص من الأحماض النووية الموجودة ، ويجب تحديد وجود التلوث من خلال تجارب التحكم السلبية.

■ كاشف التلوث - قصف الكواشف وتخزينها في درجة حرارة منخفضة.

A-2 رئيس الوزراءr

■ ميغاغرام²⁺ تركيز منخفض للغاية - زيادة Mg بشكل صحيح²⁺ التركيز: تحسين Mg²⁺ التركيز بسلسلة من التفاعلات من 1 مم إلى 3 مم بفاصل 0.5 ملي مولار لتحديد أفضل ملغ²⁺ التركيز لكل قالب وتمهيدي.

■ تصميم تمهيدي غير لائق ، والتسلسل المستهدف له تجانس مع التسلسل غير المستهدف. —— إعادة تصميم الاشعال.

س: التضخيم غير المحدد

الظواهر: نطاقات تضخيم PCR غير متوافقة مع الحجم المتوقع ، سواء كان كبيرًا أو صغيرًا ، أو في بعض الأحيان تحدث كل من نطاقات التضخيم المحددة ونطاقات التضخيم غير المحددة.

أ -1 برايمر

■ ضعف خصوصية البرايمر

—— إعادة التصميم التمهيدي.

■ تركيز التمهيدي مرتفع جدًا - - قم بزيادة درجة حرارة التمسخ بشكل صحيح وإطالة وقت التمسخ.

A-2 ملغ²⁺ تركيز

■ The Mg²⁺ التركيز مرتفع جدًا - قلل تركيز Mg2 + بشكل صحيح: قم بتحسين Mg²⁺ التركيز بسلسلة من التفاعلات من 1 مم إلى 3 مم بفاصل 0.5 ملي مولار لتحديد أفضل ملغ²⁺ التركيز لكل قالب وتمهيدي.

A-3 البوليميراز الحراري

■ كمية الإنزيم الزائدة - تقليل كمية الإنزيم بشكل مناسب على فترات 0.5 وحدة.

A-4 درجة حرارة التلدين

■ درجة حرارة التلدين منخفضة جدًا - - قم بزيادة درجة حرارة التلدين بشكل مناسب أو اعتماد طريقة التلدين ذات المرحلتين

دورات A-5 PCR

■ دورات PCR كثيرة جدًا —— قم بتقليل عدد دورات PCR.

س: عصابات غير مكتملة أو مسحة

أ -1 برايمر- خصوصية رديئة - إعادة تصميم التمهيدي ، وتغيير موضع وطول التمهيدي لتعزيز خصوصيته ؛ أو تنفيذ PCR متداخلة.

A-2 قالب DNA

—القالب ليس خالصًا —— قم بتنقية القالب أو استخرج الحمض النووي باستخدام مجموعات التنقية.

أ -3 ملغ²⁺ تركيز

—— إم جي²⁺ التركيز مرتفع للغاية - قلل Mg بشكل صحيح²⁺ التركيز: تحسين Mg²⁺ التركيز بسلسلة من التفاعلات من 1 مم إلى 3 مم بفاصل 0.5 ملي مولار لتحديد أفضل ملغ²⁺ التركيز لكل قالب وتمهيدي.

A-4 dNTP

—— تركيز dNTPs مرتفع للغاية —— تقليل تركيز dNTP بشكل مناسب

أ -5 درجة حرارة التلدين

—— درجة حرارة تلدين منخفضة للغاية —— زيادة درجة حرارة التلدين بشكل مناسب

دورات A-6

—— دورات كثيرة جدًا —— قم بتحسين رقم الدورة

س: ما مقدار قالب الحمض النووي الذي يجب إضافته في نظام تفاعل 50 ميكرولتر PCR؟

س: كيف تضخيم شظايا طويلة؟

الخطوة الأولى هي اختيار البوليميراز المناسب. لا يمكن تصحيح بوليميراز Taq العادي بسبب نقص نشاط نوكلياز خارجي 3'-5 '، وسيؤدي عدم التطابق إلى تقليل كفاءة التمديد للأجزاء بشكل كبير. لذلك ، لا يستطيع بوليميراز Taq العادي تضخيم الأجزاء المستهدفة التي يزيد حجمها عن 5 كيلو بايت بشكل فعال. يجب اختيار بوليميراز Taq مع تعديل خاص أو بوليميراز آخر عالي الدقة لتحسين كفاءة التمديد وتلبية احتياجات تضخيم الشظايا الطويلة. بالإضافة إلى ذلك ، يتطلب تضخيم الشظايا الطويلة أيضًا تعديلًا مطابقًا لتصميم التمهيدي ، ووقت التمسخ ، ووقت التمديد ، ودرجة الحموضة العازلة ، وما إلى ذلك. عادةً ، يمكن أن تؤدي البادئات ذات 18-24 زوج قاعدي إلى إنتاجية أفضل. من أجل منع تلف القالب ، يجب تقليل وقت التمسخ عند 94 درجة مئوية إلى 30 ثانية أو أقل لكل دورة ، ويجب أن يكون وقت رفع درجة الحرارة إلى 94 درجة مئوية قبل التضخيم أقل من دقيقة واحدة. علاوة على ذلك ، فإن ضبط درجة حرارة التمديد عند حوالي 68 درجة مئوية وتصميم وقت التمديد وفقًا لمعدل 1 كيلو بايت / دقيقة يمكن أن يضمن تضخيمًا فعالًا للشظايا الطويلة.

س: كيفية تحسين دقة التضخيم لـ PCR؟

يمكن تقليل معدل الخطأ لتضخيم PCR باستخدام بوليميرات DNA مختلفة بدقة عالية. من بين جميع بوليمرات Taq DNA الموجودة حتى الآن ، فإن إنزيم Pfu لديه أقل معدل خطأ وأعلى دقة (انظر الجدول المرفق). بالإضافة إلى اختيار الإنزيم ، يمكن للباحثين تقليل معدل طفرة تفاعل البوليميراز المتسلسل عن طريق تحسين ظروف التفاعل ، بما في ذلك تحسين تكوين المخزن المؤقت وتركيز البوليميراز الحراري وتحسين رقم دورة PCR.

اكتب رسالتك هنا وأرسلها إلينا