مجموعة TIANcombi DNA Lyse & Det PCR

تنقية سريعة للحمض النووي من المواد المختلفة للكشف عن تفاعل البوليميراز المتسلسل.

تتبنى مجموعة TIANcombi DNA Lyse & Det PCR تصميمًا فريدًا للتغليف يتضمن جميع الكواشف لإعداد الحمض النووي الجيني السريع وتضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). إنه قابل للتطبيق على تنقية الحمض النووي للجينوم بخطوة واحدة من عينات مختلفة (الأنسجة النباتية والبذور والأنسجة الحيوانية والدم والخميرة والبكتيريا) وتضخيم واكتشاف PCR اللاحق. لا يلزم إزالة البروتين والحمض النووي الريبي والمستقلبات الثانوية الأخرى واستخراج المذيبات العضوية وكذلك خطوات ترسيب الإيثانول في عملية التنقية بأكملها ، مما يجعل العملية بسيطة وسريعة. جودة المنتج مستقرة وموثوقة.

2 × Det PCR MasterMix الذي توفره هذه المجموعة هو كاشف PCR متوافق للغاية يمكنه تضخيم الحمض النووي بكفاءة وبشكل خاص دون الحاجة إلى إزالة الشوائب مثل البروتينات. يحتوي هذا الكاشف على بوليميريز DNA Taq و dNTPs و MgCl2، المخزن المؤقت ، وكذلك المحسن والمحسن والمثبت لتفاعل PCR. تطبيق الكاشف يجعل تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل سريعًا وبسيطًا وحساسًا ومحددًا ومستقرًا. لذلك ، فإن هذه المجموعة مناسبة بشكل خاص للفحص عالي الإنتاجية.

قط. لا حجم التعبئة
4992527 20 ميكرولتر × 50 rxn
4992528 20 ميكرولتر × 200 rxn

 

 


تفاصيل المنتج

مثال تجريبي

التعليمات

علامات المنتج

سمات

■ بسيط وسريع: يمكن استخراج الحمض النووي من الأنسجة المختلفة في 5 دقائق دون الحاجة إلى طحن النيتروجين السائل.
■ تطبيقات واسعة: تنطبق على أوراق النبات ، والبذور ، والأنسجة الحيوانية ، وعينات الدم (الدم الطازج ، ومضادات التخثر ، والجلطات الدموية ، وبقع الدم المجففة ، وما إلى ذلك) ، والخميرة والبكتيريا.
■ توافق قوي: كاشف تفاعل البوليميراز المتسلسل مناسب لتضخيم الحمض النووي المستخرج من مصادر عينات مختلفة.

التطبيقات

■ الكشف عن الجينات: الاختيار الأمثل لاكتشاف الجينات على نطاق واسع.

ملاحظات هامة

■ بالنسبة للعينات التي تحتوي على نسبة عالية من الفينولات ، مثل أوراق القطن ، يجب أن تكون كمية إدخال العينة أقل من 0.4 مجم ، وإلا سيتأثر تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل.

يمكن تخصيص جميع المنتجات لـ ODM / OEM. للتفاصيل،الرجاء النقر فوق خدمة مخصصة (ODM / OEM)


  • سابق:
  • التالي:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Exampl تم استخلاص الحمض النووي من 5 ملغ من أوراق وبذور الذرة والقمح والأرز وفول الصويا والقطن على التوالي. تم تضخيم الحمض النووي بواسطة PCR باستخدام بادئات محددة. تم تحميل 6 ميكرولتر من الحمض النووي من إجمالي 20 ميكرولتر شطف لكل حارة.
    1: جينوم التحكم الإيجابي ؛ 2: ترك العينات ؛ 3: عينات البذور. 4: المجلس الوطني الانتقالي ؛ 5: D2000 الاشعال
    Experimental Example م: TIANGEN Marker D2000 ؛ 1: تحكم إيجابي ؛
    2-7: عدد بقع الدم المجففة على ورق الترشيح هو 1-6 على التوالي ؛ 8: التحكم السلبي.
    تم استخدام المثقاب 3 مم لأخذ بقع الدم المجففة من ورق الترشيح كمادة لاختبار الاستخلاص.
    تم تحميل 6 ميكرولتر من الحمض النووي من إجمالي 20 ميكرولتر شطف لكل حارة.
    Experimental Exampl م: TIANGEN Marker D2000 ؛ 1: التحكم الإيجابي (تم استخدام الحمض النووي الجيني كقالب) ؛ 2-7: كمية الدم المضافة هي 10 مايكرولتر ، 20 ميكرولتر ، 30 ميكرولتر ، 40 ميكرولتر ، 50 ميكرولتر ، 60 ميكرولتر على التوالي ؛ 8-13: كمية الدم المضاف هي 10 مايكرولتر ، 20 ميكرولتر ، 30 ميكرولتر ، 40 ميكرولتر ، 50 ميكرولتر و 60 ميكرولتر على التوالي ؛ 14: المجلس الوطني الانتقالي.
    تم تحميل 6 ميكرولتر من الحمض النووي من إجمالي 20 ميكرولتر شطف على هلام الاغاروز.
    س: لا نطاقات تضخيم

    نموذج A-1

    ■ يحتوي القالب على شوائب بروتينية أو مثبطات Taq ، وما إلى ذلك - - تنقية قالب الحمض النووي ، وإزالة شوائب البروتين أو استخراج الحمض النووي باستخدام مجموعات التنقية.

    ■ لم يكتمل تمسخ القالب - - قم بزيادة درجة حرارة التمسخ بشكل مناسب وإطالة وقت التمسخ.

    ■ تدهور القالب - إعادة تجهيز القالب.

    A-2 التمهيدي

    ■ نوعية رديئة من البرايمر - أعد تركيب البرايمر.

    ■ تحلل التمهيدي ——Aliquot الاشعال عالية التركيز إلى حجم صغير للحفظ. تجنب التجميد والذوبان المتكرر أو الاحتفاظ بالتبريد لمدة 4 درجات مئوية على المدى الطويل.

    ■ تصميم غير مناسب للبادئات (على سبيل المثال ، طول التمهيدي غير كافٍ ، يتكون ثنائي الطبقة بين البادئات ، وما إلى ذلك) - إعادة تصميم الاشعال (تجنب تشكيل ثنائي التمهيدي والبنية الثانوية)

    أ -3 ملغ2+تركيز

    ■ ميغاغرام2+ تركيز منخفض للغاية - زيادة Mg بشكل صحيح2+ التركيز: تحسين Mg2+ التركيز بسلسلة من التفاعلات من 1 مم إلى 3 مم بفاصل 0.5 ملي مولار لتحديد أفضل ملغ2+ التركيز لكل قالب وتمهيدي.

    A-4 درجة حرارة التلدين

    ■ درجة حرارة التلدين المرتفعة تؤثر على ارتباط البرايمر والقالب. —— تقليل درجة حرارة التلدين وتحسين الحالة بتدرج 2 درجة مئوية.

    A-5 تمديد الوقت

    ■ وقت تمديد قصير - - زيادة وقت التمديد.

    س: خطأ إيجابي

    الظواهر: تظهر العينات السلبية أيضًا نطاقات التسلسل المستهدفة.

    A-1 تلوث PCR

    ■ التلوث المتبادل للتسلسل المستهدف أو منتجات التضخيم —— بحذر لا تقم بمص العينة التي تحتوي على تسلسل الهدف في العينة السلبية أو انسكابها خارج أنبوب جهاز الطرد المركزي. يجب تعقيم الكواشف أو المعدات للتخلص من الأحماض النووية الموجودة ، ويجب تحديد وجود التلوث من خلال تجارب التحكم السلبية.

    ■ كاشف التلوث - قصف الكواشف وتخزينها في درجة حرارة منخفضة.

    A-2 رئيس الوزراءr

    ■ ميغاغرام2+ تركيز منخفض للغاية - زيادة Mg بشكل صحيح2+ التركيز: تحسين Mg2+ التركيز بسلسلة من التفاعلات من 1 مم إلى 3 مم بفاصل 0.5 ملي مولار لتحديد أفضل ملغ2+ التركيز لكل قالب وتمهيدي.

    ■ تصميم تمهيدي غير لائق ، والتسلسل المستهدف له تجانس مع التسلسل غير المستهدف. —— إعادة تصميم الاشعال.

    س: التضخيم غير المحدد

    الظواهر: نطاقات تضخيم PCR غير متوافقة مع الحجم المتوقع ، سواء كان كبيرًا أو صغيرًا ، أو في بعض الأحيان تحدث كل من نطاقات التضخيم المحددة ونطاقات التضخيم غير المحددة.

    أ -1 برايمر

    ■ ضعف خصوصية البرايمر

    —— إعادة التصميم التمهيدي.

    ■ تركيز التمهيدي مرتفع جدًا - - قم بزيادة درجة حرارة التمسخ بشكل صحيح وإطالة وقت التمسخ.

    A-2 ملغ2+ تركيز

    ■ The Mg2+ التركيز مرتفع جدًا - قلل تركيز Mg2 + بشكل صحيح: قم بتحسين Mg2+ التركيز بسلسلة من التفاعلات من 1 مم إلى 3 مم بفاصل 0.5 ملي مولار لتحديد أفضل ملغ2+ التركيز لكل قالب وتمهيدي.

    A-3 البوليميراز الحراري

    ■ كمية الإنزيم الزائدة - تقليل كمية الإنزيم بشكل مناسب على فترات 0.5 وحدة.

    A-4 درجة حرارة التلدين

    ■ درجة حرارة التلدين منخفضة جدًا - - قم بزيادة درجة حرارة التلدين بشكل مناسب أو اعتماد طريقة التلدين ذات المرحلتين

    دورات A-5 PCR

    ■ دورات PCR كثيرة جدًا —— قم بتقليل عدد دورات PCR.

    س: عصابات غير مكتملة أو مسحة

    أ -1 برايمر- خصوصية رديئة - إعادة تصميم التمهيدي ، وتغيير موضع وطول التمهيدي لتعزيز خصوصيته ؛ أو تنفيذ PCR متداخلة.

    A-2 قالب DNA

    —القالب ليس خالصًا —— قم بتنقية القالب أو استخرج الحمض النووي باستخدام مجموعات التنقية.

    أ -3 ملغ2+ تركيز

    —— إم جي2+ التركيز مرتفع للغاية - قلل Mg بشكل صحيح2+ التركيز: تحسين Mg2+ التركيز بسلسلة من التفاعلات من 1 مم إلى 3 مم بفاصل 0.5 ملي مولار لتحديد أفضل ملغ2+ التركيز لكل قالب وتمهيدي.

    A-4 dNTP

    —— تركيز dNTPs مرتفع للغاية —— تقليل تركيز dNTP بشكل مناسب

    أ -5 درجة حرارة التلدين

    —— درجة حرارة تلدين منخفضة للغاية —— زيادة درجة حرارة التلدين بشكل مناسب

    دورات A-6

    —— دورات كثيرة جدًا —— قم بتحسين رقم الدورة

    س: ما مقدار قالب الحمض النووي الذي يجب إضافته في نظام تفاعل 50 ميكرولتر PCR؟
    ytry
    س: كيف تضخيم شظايا طويلة؟

    الخطوة الأولى هي اختيار البوليميراز المناسب. لا يمكن تصحيح بوليميراز Taq العادي بسبب نقص نشاط نوكلياز خارجي 3'-5 '، وسيؤدي عدم التطابق إلى تقليل كفاءة التمديد للأجزاء بشكل كبير. لذلك ، لا يستطيع بوليميراز Taq العادي تضخيم الأجزاء المستهدفة التي يزيد حجمها عن 5 كيلو بايت بشكل فعال. يجب اختيار بوليميراز Taq مع تعديل خاص أو بوليميراز آخر عالي الدقة لتحسين كفاءة التمديد وتلبية احتياجات تضخيم الشظايا الطويلة. بالإضافة إلى ذلك ، يتطلب تضخيم الشظايا الطويلة أيضًا تعديلًا مطابقًا لتصميم التمهيدي ، ووقت التمسخ ، ووقت التمديد ، ودرجة الحموضة العازلة ، وما إلى ذلك. عادةً ، يمكن أن تؤدي البادئات ذات 18-24 زوج قاعدي إلى إنتاجية أفضل. من أجل منع تلف القالب ، يجب تقليل وقت التمسخ عند 94 درجة مئوية إلى 30 ثانية أو أقل لكل دورة ، ويجب أن يكون وقت رفع درجة الحرارة إلى 94 درجة مئوية قبل التضخيم أقل من دقيقة واحدة. علاوة على ذلك ، فإن ضبط درجة حرارة التمديد عند حوالي 68 درجة مئوية وتصميم وقت التمديد وفقًا لمعدل 1 كيلو بايت / دقيقة يمكن أن يضمن تضخيمًا فعالًا للشظايا الطويلة.

    س: كيفية تحسين دقة التضخيم لـ PCR؟

    يمكن تقليل معدل الخطأ لتضخيم PCR باستخدام بوليميرات DNA مختلفة بدقة عالية. من بين جميع بوليمرات Taq DNA الموجودة حتى الآن ، فإن إنزيم Pfu لديه أقل معدل خطأ وأعلى دقة (انظر الجدول المرفق). بالإضافة إلى اختيار الإنزيم ، يمكن للباحثين تقليل معدل طفرة تفاعل البوليميراز المتسلسل عن طريق تحسين ظروف التفاعل ، بما في ذلك تحسين تكوين المخزن المؤقت وتركيز البوليميراز الحراري وتحسين رقم دورة PCR.

    اكتب رسالتك هنا وأرسلها إلينا