مجموعة استخراج وتضخيم المحاصيل المعدلة وراثيًا

مناسب بشكل خاص لاستخراج المحاصيل المعدلة وراثيًا واكتشاف تفاعل البوليميراز المتسلسل المعدّل وراثيًا.

تم تطوير مجموعة أدوات استخراج وتضخيم المحاصيل المعدلة وراثيًا خصيصًا لاكتشاف تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) لمحاصيل الكائنات المعدلة وراثيًا. يمكن لمخزن التحلل الفريد الموجود في الجزء A من المجموعة تحليل أنسجة المحاصيل الرئيسية - القمح والذرة والأرز والقطن وفول الصويا ، لإطلاق المكونات ذات الصلة مثل الأحماض النووية والبروتينات. يمكن لاستخراج الفينول / الكلوروفورم جنبًا إلى جنب مع RNase المحدد تنقية الحمض النووي الجيني عالي النقاء بدون شوائب مثل RNA والبروتين وأيونات المعادن. يمكن تطبيق الحمض النووي المنقى في الكشف اللاحق عن تفاعل البوليميراز المتسلسل. الجزء B من المجموعة عبارة عن نظام تفاعل PCR بسيط مكون من عنصرين يحتوي على 2 × GMO PCR Buffer و GMO DNA Polymerase. إن بوليميراز الحمض النووي المعدّل وراثيًا عبارة عن بوليميراز قابل للحرارة معدّل بأجسام مضادة. يحتوي المخزن المؤقت 2 × GMO PCR على مكونات مختلفة مثل MgCl2، dNTPs ، مثبت تفاعل PCR ، محسن ومحسن بتركيز 2 × كائن معدّل وراثيًا. إنه يتميز بالتشغيل السريع والبسيط ، والحساسية العالية ، والخصوصية القوية ، والاستقرار الجيد ، وما إلى ذلك. ويمكن استخدامه مع الجزء أ لاكتشاف تفاعل البوليميراز المتسلسل المعدّل وراثيًا للمحاصيل المعدلة وراثيًا.

قط. لا حجم التعبئة
4992905 200 آر إكس إن

 

 


تفاصيل المنتج

مثال تجريبي

التعليمات

علامات المنتج

سمات

قابلية التطبيق على نطاق واسع: يمكن لهذه المجموعة استخراج الحمض النووي الجيني عالي الجودة من خمسة محاصيل رئيسية معدلة وراثيًا.
■ بسيط وسريع: يمكن إكمال استخراج الحمض النووي الجيني لمحاصيل الكائنات المعدلة وراثيًا في غضون ساعتين. لا حاجة لأجهزة الطرد المركزي المبردة الكبيرة ، ومتطلبات منخفضة للأجهزة والمعدات. مناسب للاستخراج السريع للحمض النووي الجيني لمحاصيل الكائنات المعدلة وراثيًا على جميع مستويات المؤسسات البحثية.
■ كفاءة وخصوصية عالية: يضمن المخزن المؤقت الفريد لبوليميراز Taq المعدل بالأجسام المضادة تضخيمًا فعالًا للبوليميراز ، وهو أكثر تحديدًا من بوليميريز Taq العادي.

التطبيقات

يمكن للمجموعة استخراج الحمض النووي الجيني عالي الجودة من المحاصيل المعدلة وراثيًا الرئيسية مثل القمح والذرة والأرز والقطن وفول الصويا ، وإجراء الكشف عن تفاعل البوليميراز المتسلسل المعدّل وراثيًا على المحاصيل المعدلة وراثيًا.

يمكن تخصيص جميع المنتجات لـ ODM / OEM. للتفاصيل،الرجاء النقر فوق خدمة مخصصة (ODM / OEM)


  • سابق:
  • التالي:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example استخراج الحمض النووي الجيني
    تم إجراء استخراج الحمض النووي الجيني على 100 ملجم من أوراق الأرز والذرة وفول الصويا والقطن والقمح على التوالي. التجربة تم إعادتها مرتين. تم تحميل 3 ميكرولتر من الحمض النووي من إجمالي 100 ميكرولتر شطف لكل حارة.
    كان تركيز هلام الاغاروز 2٪. تم إجراء التفريد تحت 6 فولت / سم لمدة 20 دقيقة.
    D15000: TIANGEN D15000 DNA Marker.
    Experimental Example كشف PCR
    تم تضخيم الحمض النووي الجيني للأرز والذرة وفول الصويا والقطن والقمح على التوالي. التجربة تم إعادتها مرتين. تم تحميل 6 ميكرولتر من إجمالي 20 ميكرولتر من نظام التفاعل لكل حارة.
    كان تركيز هلام الاغاروز 2٪. تم إجراء التفريد تحت 6 فولت / سم لمدة 20 دقيقة.
    D15000: TIANGEN D15000 DNA Marker.
    س: لا نطاقات تضخيم

    نموذج A-1

    ■ يحتوي القالب على شوائب بروتينية أو مثبطات Taq ، وما إلى ذلك - - تنقية قالب الحمض النووي ، وإزالة شوائب البروتين أو استخراج الحمض النووي باستخدام مجموعات التنقية.

    ■ لم يكتمل تمسخ القالب - - قم بزيادة درجة حرارة التمسخ بشكل مناسب وإطالة وقت التمسخ.

    ■ تدهور القالب - إعادة تجهيز القالب.

    A-2 التمهيدي

    ■ نوعية رديئة من البرايمر - أعد تركيب البرايمر.

    ■ تحلل التمهيدي ——Aliquot الاشعال عالية التركيز إلى حجم صغير للحفظ. تجنب التجميد والذوبان المتكرر أو الاحتفاظ بالتبريد لمدة 4 درجات مئوية على المدى الطويل.

    ■ تصميم غير مناسب للبادئات (على سبيل المثال ، طول التمهيدي غير كافٍ ، يتكون ثنائي الطبقة بين البادئات ، وما إلى ذلك) - إعادة تصميم الاشعال (تجنب تشكيل ثنائي التمهيدي والبنية الثانوية)

    أ -3 ملغ2+تركيز

    ■ ميغاغرام2+ تركيز منخفض للغاية - زيادة Mg بشكل صحيح2+ التركيز: تحسين Mg2+ التركيز بسلسلة من التفاعلات من 1 مم إلى 3 مم بفاصل 0.5 ملي مولار لتحديد أفضل ملغ2+ التركيز لكل قالب وتمهيدي.

    A-4 درجة حرارة التلدين

    ■ درجة حرارة التلدين المرتفعة تؤثر على ارتباط البرايمر والقالب. —— تقليل درجة حرارة التلدين وتحسين الحالة بتدرج 2 درجة مئوية.

    A-5 تمديد الوقت

    ■ وقت تمديد قصير - - زيادة وقت التمديد.

    س: خطأ إيجابي

    الظواهر: تظهر العينات السلبية أيضًا نطاقات التسلسل المستهدفة.

    A-1 تلوث PCR

    ■ التلوث المتبادل للتسلسل المستهدف أو منتجات التضخيم —— بحذر لا تقم بمص العينة التي تحتوي على تسلسل الهدف في العينة السلبية أو انسكابها خارج أنبوب جهاز الطرد المركزي. يجب تعقيم الكواشف أو المعدات للتخلص من الأحماض النووية الموجودة ، ويجب تحديد وجود التلوث من خلال تجارب التحكم السلبية.

    ■ كاشف التلوث - قصف الكواشف وتخزينها في درجة حرارة منخفضة.

    A-2 رئيس الوزراءr

    ■ ميغاغرام2+ تركيز منخفض للغاية - زيادة Mg بشكل صحيح2+ التركيز: تحسين Mg2+ التركيز بسلسلة من التفاعلات من 1 مم إلى 3 مم بفاصل 0.5 ملي مولار لتحديد أفضل ملغ2+ التركيز لكل قالب وتمهيدي.

    ■ تصميم تمهيدي غير لائق ، والتسلسل المستهدف له تجانس مع التسلسل غير المستهدف. —— إعادة تصميم الاشعال.

    س: التضخيم غير المحدد

    الظواهر: نطاقات تضخيم PCR غير متوافقة مع الحجم المتوقع ، سواء كان كبيرًا أو صغيرًا ، أو في بعض الأحيان تحدث كل من نطاقات التضخيم المحددة ونطاقات التضخيم غير المحددة.

    أ -1 برايمر

    ■ ضعف خصوصية البرايمر

    —— إعادة التصميم التمهيدي.

    ■ تركيز التمهيدي مرتفع جدًا - - قم بزيادة درجة حرارة التمسخ بشكل صحيح وإطالة وقت التمسخ.

    A-2 ملغ2+ تركيز

    ■ The Mg2+ التركيز مرتفع جدًا - قلل تركيز Mg2 + بشكل صحيح: قم بتحسين Mg2+ التركيز بسلسلة من التفاعلات من 1 مم إلى 3 مم بفاصل 0.5 ملي مولار لتحديد أفضل ملغ2+ التركيز لكل قالب وتمهيدي.

    A-3 البوليميراز الحراري

    ■ كمية الإنزيم الزائدة - تقليل كمية الإنزيم بشكل مناسب على فترات 0.5 وحدة.

    A-4 درجة حرارة التلدين

    ■ درجة حرارة التلدين منخفضة جدًا - - قم بزيادة درجة حرارة التلدين بشكل مناسب أو اعتماد طريقة التلدين ذات المرحلتين

    دورات A-5 PCR

    ■ دورات PCR كثيرة جدًا —— قم بتقليل عدد دورات PCR.

    س: عصابات غير مكتملة أو مسحة

    أ -1 برايمر- خصوصية رديئة - إعادة تصميم التمهيدي ، وتغيير موضع وطول التمهيدي لتعزيز خصوصيته ؛ أو تنفيذ PCR متداخلة.

    A-2 قالب DNA

    —القالب ليس خالصًا —— قم بتنقية القالب أو استخرج الحمض النووي باستخدام مجموعات التنقية.

    أ -3 ملغ2+ تركيز

    —— إم جي2+ التركيز مرتفع للغاية - قلل Mg بشكل صحيح2+ التركيز: تحسين Mg2+ التركيز بسلسلة من التفاعلات من 1 مم إلى 3 مم بفاصل 0.5 ملي مولار لتحديد أفضل ملغ2+ التركيز لكل قالب وتمهيدي.

    A-4 dNTP

    —— تركيز dNTPs مرتفع للغاية —— تقليل تركيز dNTP بشكل مناسب

    أ -5 درجة حرارة التلدين

    —— درجة حرارة تلدين منخفضة للغاية —— زيادة درجة حرارة التلدين بشكل مناسب

    دورات A-6

    —— دورات كثيرة جدًا —— قم بتحسين رقم الدورة

    س: ما مقدار قالب الحمض النووي الذي يجب إضافته في نظام تفاعل 50 ميكرولتر PCR؟
    ytry
    س: كيف تضخيم شظايا طويلة؟

    الخطوة الأولى هي اختيار البوليميراز المناسب. لا يمكن تصحيح بوليميراز Taq العادي بسبب نقص نشاط نوكلياز خارجي 3'-5 '، وسيؤدي عدم التطابق إلى تقليل كفاءة التمديد للأجزاء بشكل كبير. لذلك ، لا يستطيع بوليميراز Taq العادي تضخيم الأجزاء المستهدفة التي يزيد حجمها عن 5 كيلو بايت بشكل فعال. يجب اختيار بوليميراز Taq مع تعديل خاص أو بوليميراز آخر عالي الدقة لتحسين كفاءة التمديد وتلبية احتياجات تضخيم الشظايا الطويلة. بالإضافة إلى ذلك ، يتطلب تضخيم الشظايا الطويلة أيضًا تعديلًا مطابقًا لتصميم التمهيدي ، ووقت التمسخ ، ووقت التمديد ، ودرجة الحموضة العازلة ، وما إلى ذلك. عادةً ، يمكن أن تؤدي البادئات ذات 18-24 زوج قاعدي إلى إنتاجية أفضل. من أجل منع تلف القالب ، يجب تقليل وقت التمسخ عند 94 درجة مئوية إلى 30 ثانية أو أقل لكل دورة ، ويجب أن يكون وقت رفع درجة الحرارة إلى 94 درجة مئوية قبل التضخيم أقل من دقيقة واحدة. علاوة على ذلك ، فإن ضبط درجة حرارة التمديد عند حوالي 68 درجة مئوية وتصميم وقت التمديد وفقًا لمعدل 1 كيلو بايت / دقيقة يمكن أن يضمن تضخيمًا فعالًا للشظايا الطويلة.

    س: كيفية تحسين دقة التضخيم لـ PCR؟

    يمكن تقليل معدل الخطأ لتضخيم PCR باستخدام بوليميرات DNA مختلفة بدقة عالية. من بين جميع بوليمرات Taq DNA الموجودة حتى الآن ، فإن إنزيم Pfu لديه أقل معدل خطأ وأعلى دقة (انظر الجدول المرفق). بالإضافة إلى اختيار الإنزيم ، يمكن للباحثين تقليل معدل طفرة تفاعل البوليميراز المتسلسل عن طريق تحسين ظروف التفاعل ، بما في ذلك تحسين تكوين المخزن المؤقت وتركيز البوليميراز الحراري وتحسين رقم دورة PCR.

    اكتب رسالتك هنا وأرسلها إلينا