مجموعة الدم المباشر PCR

تضخيم سريع للجين المستهدف مباشرة باستخدام الدم كقالب بدون استخلاص.

تعتمد هذه المجموعة على بوليميراز DNA المضاد للمثبطات وراثيًا لتضخيم الجينات أحادية النسخة في الجينوم البشري بكفاءة. يساعد نظام المخزن المؤقت المحسن جيدًا في هذه المجموعة البوليميراز على مقاومة تثبيط مثبطات PCR بقوة ، وبالتالي يمكنه تضخيم الحمض النووي مباشرة باستخدام الدم والخلايا المستنبتة كقوالب. هذا المنتج سهل التشغيل ولا يتطلب خطوات معقدة مثل تنقية الحمض النووي أو المعالجة المسبقة للعينة.
يتم توفير هذه المجموعة على شكل 2 × MasterMix ، ويمكن إجراء التفاعل ببساطة عن طريق إضافة قالب الدم وأشعال الكشف المقابلة. يمكن تطبيقه على الخلايا المستزرعة للثدييات مثل البشر والفئران والخنازير والماشية والأنواع الأخرى ، بالإضافة إلى الدم الكامل الطازج أو 4 المحفوظة بالتبريد ومضادات التخثر (EDTA ، السترات ، الهيبارين) ، الجلطات الدموية السائلة وبقع الدم الجافة المخزنة على بطاقات تجارية Whatman 903 و FTA Elute.

قط. لا	حجم التعبئة
4992529	20 ميكرولتر × 100 rxn
4992530	20 ميكرولتر × 500 rxn

أرسل بريدًا إلكترونيًا إلينا

تفاصيل المنتج

مثال تجريبي

التعليمات

علامات المنتج

سمات

■ بسيط وسريع: يمكن إجراء تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل مباشرة باستخدام الدم كقالب ، دون الحاجة إلى الخطوات الشاقة لإعداد العينة واستخراج الحمض النووي.
■ درجة نقاء عالية: يمكن أن يساعد تخطي المعالجة المسبقة للعينة وخطوات استخراج الحمض النووي في تجنب تلوث العينات المتبادل.
■ إنتاجية عالية: يمكن إجراء تحديد PCR للعينات واسعة النطاق من خلال الجمع بين المجموعة مع 96/384 لوحة PCR جيدة.
■ عالمية قوية: يمكن لهذه المجموعة أن تضخم بكفاءة شظايا أو شظايا GC ذات البنية الثانوية المعقدة ، ويمكن أن يصل طول التضخيم إلى 5 كيلو بايت.
■ مقاومة قوية للإجهاد: يمكن تطبيق هذه المجموعة على أنواع مختلفة وعينات الدم المحفوظة بطرق مختلفة.

التطبيقات

تحتوي منتجات PCR لهذه المجموعة على الحرف "A" في الطرف 3′ ، والذي يمكن استخدامه مباشرة لاستنساخ ناقل TA. يمكن استخدام هذه المجموعة لتضخيم شظايا الحمض النووي الجيني والتحليل الجيني عالي الإنتاجية وتحليل التنميط الجيني (مثل اكتشاف الجينات).

يمكن تخصيص جميع المنتجات لـ ODM / OEM. للتفاصيل،الرجاء النقر فوق خدمة مخصصة (ODM / OEM)

سابق: مجموعة TIANcombi DNA Lyse & Det PCR

التالي: مجموعة أنسجة الماوس PCR Direct

	باستخدام مانع تخثر الدم EDTA البشري كقالب ، تم تضخيم 4 جينات بمحتويات GC مختلفة بواسطة Blood Direct PCR Kit. كان نظام تفاعل PCR 20 ميكرولتر ، وتم استخدام 1 ميكرولتر من الدم كقالب. M: TIANGEN Marker II ؛ 1: حجم الجزء 1090 نقطة أساس ، محتوى GC 68.1٪ ؛ 2: حجم الجزء 1915 نقطة أساس ، محتوى GC 70.4٪ ؛ 3: حجم القطعة 448 نقطة أساس ، محتوى GC 74.8٪ ؛ 4: حجم القطعة 1527 نقطة أساس ، محتوى GC 61.5٪. النتائج التجريبية: يمكن لـ Blood Direct PCR Kit تضخيم شظايا الحمض النووي بشكل فعال مع محتوى GC في نطاق 61.5٪ -74.8٪ ، مما يشير إلى أنها قادرة على تضخيم شظايا GC عالية.
	باستخدام مانع تخثر EDTA البشري كقالب ، تم تضخيم 5 جينات بأطوال مختلفة (ActB و Prp و DN1.0 و Hn2.0 و Hn4.0) بواسطة Blood Direct PCR Kit. كان نظام تفاعل PCR 20 ميكرولتر ، وتم استخدام 1 ميكرولتر من الدم كقالب. M: TIANGEN Marker II ؛ 1-3: 3 عينات دم مختلفة ؛ NTC: التحكم بدون الاشعال. النتائج التجريبية: يمكن لـ Blood Direct PCR Kit تضخيم الأجزاء بطول يصل إلى 4 كيلو بايت ، مما يشير إلى قدرتها على تضخيم الأجزاء الطويلة.
	باستخدام مانع تخثر الدم EDTA البشري كقالب ، تم استخدام Blood Direct PCR Kit للكشف عن PCR لعينات الدم المختلفة. كان نظام تفاعل PCR 20 ميكرولتر ، وتم استخدام 1 ميكرولتر من الدم كقالب. M: TIANGEN Marker II ؛ 1-9: كمية تحميل الدم هي 0.1 ميكرولتر ، 0.2 ميكرولتر ، 0.3 ميكرولتر ، 0.4 ميكرولتر ، 1 ميكرولتر ، 2 ميكرولتر ، 3 ميكرولتر ، 4 ميكرولتر و 5 ميكرولتر على التوالي ؛ NTC: التحكم بدون قالب النتائج التجريبية: تتميز مجموعة Blood Direct PCR بمقاومة قوية للدم ويمكنها تضخيم عينات الدم بنطاق تحميل يبلغ 0.1-5 ميكرولتر.
	تم استخدام عينات الدم من البشر والجرذان والدجاج وأنواع أخرى مع معالجات مختلفة كقوالب. تم استخدام Blood Direct PCR Kit لتضخيم PRNP (الإنسان ، 750 نقطة أساس) ، الأكتين (الجرذ ، 200 نقطة أساس) ، والأكتين (الدجاج ، 1.0 كيلو بايت). كان نظام تفاعل PCR 20 ميكرولتر ، وتم استخدام 1 ميكرولتر من الدم كقالب. م: TIANGEN Marker II. النتائج التجريبية: يمكن تطبيق Blood Direct PCR Kit على مجموعة واسعة من العينات ، ويمكن إجراء الكشف المباشر عن تفاعل البوليميراز المتسلسل على عينات دم من أنواع مختلفة مع علاجات مختلفة.

س: لا نطاقات تضخيم

نموذج A-1

■ يحتوي القالب على شوائب بروتينية أو مثبطات Taq ، وما إلى ذلك - - تنقية قالب الحمض النووي ، وإزالة شوائب البروتين أو استخراج الحمض النووي باستخدام مجموعات التنقية.

■ لم يكتمل تمسخ القالب - - قم بزيادة درجة حرارة التمسخ بشكل مناسب وإطالة وقت التمسخ.

■ تدهور القالب - إعادة تجهيز القالب.

A-2 التمهيدي

■ نوعية رديئة من البرايمر - أعد تركيب البرايمر.

■ تحلل التمهيدي ——Aliquot الاشعال عالية التركيز إلى حجم صغير للحفظ. تجنب التجميد والذوبان المتكرر أو الاحتفاظ بالتبريد لمدة 4 درجات مئوية على المدى الطويل.

■ تصميم غير مناسب للبادئات (على سبيل المثال ، طول التمهيدي غير كافٍ ، يتكون ثنائي الطبقة بين البادئات ، وما إلى ذلك) - إعادة تصميم الاشعال (تجنب تشكيل ثنائي التمهيدي والبنية الثانوية)

أ -3 ملغ²⁺تركيز

■ ميغاغرام²⁺ تركيز منخفض للغاية - زيادة Mg بشكل صحيح²⁺التركيز: تحسين Mg²⁺ التركيز بسلسلة من التفاعلات من 1 مم إلى 3 مم بفاصل 0.5 ملي مولار لتحديد أفضل ملغ²⁺ التركيز لكل قالب وتمهيدي.

A-4 درجة حرارة التلدين

■ درجة حرارة التلدين المرتفعة تؤثر على ارتباط البرايمر والقالب. —— تقليل درجة حرارة التلدين وتحسين الحالة بتدرج 2 درجة مئوية.

A-5 تمديد الوقت

■ وقت تمديد قصير - - زيادة وقت التمديد.

س: خطأ إيجابي

الظواهر: تظهر العينات السلبية أيضًا نطاقات التسلسل المستهدفة.

A-1 تلوث PCR

■ التلوث المتبادل للتسلسل المستهدف أو منتجات التضخيم —— بحذر لا تقم بمص العينة التي تحتوي على تسلسل الهدف في العينة السلبية أو انسكابها خارج أنبوب جهاز الطرد المركزي. يجب تعقيم الكواشف أو المعدات للتخلص من الأحماض النووية الموجودة ، ويجب تحديد وجود التلوث من خلال تجارب التحكم السلبية.

■ كاشف التلوث - قصف الكواشف وتخزينها في درجة حرارة منخفضة.

A-2 رئيس الوزراءr

■ ميغاغرام²⁺ تركيز منخفض للغاية - زيادة Mg بشكل صحيح²⁺ التركيز: تحسين Mg²⁺ التركيز بسلسلة من التفاعلات من 1 مم إلى 3 مم بفاصل 0.5 ملي مولار لتحديد أفضل ملغ²⁺ التركيز لكل قالب وتمهيدي.

■ تصميم تمهيدي غير لائق ، والتسلسل المستهدف له تجانس مع التسلسل غير المستهدف. —— إعادة تصميم الاشعال.

س: التضخيم غير المحدد

الظواهر: نطاقات تضخيم PCR غير متوافقة مع الحجم المتوقع ، سواء كان كبيرًا أو صغيرًا ، أو في بعض الأحيان تحدث كل من نطاقات التضخيم المحددة ونطاقات التضخيم غير المحددة.

أ -1 برايمر

■ ضعف خصوصية البرايمر

—— إعادة التصميم التمهيدي.

■ تركيز التمهيدي مرتفع جدًا - - قم بزيادة درجة حرارة التمسخ بشكل صحيح وإطالة وقت التمسخ.

A-2 ملغ²⁺ تركيز

■ The Mg²⁺ التركيز مرتفع جدًا - قلل تركيز Mg2 + بشكل صحيح: قم بتحسين Mg²⁺ التركيز بسلسلة من التفاعلات من 1 مم إلى 3 مم بفاصل 0.5 ملي مولار لتحديد أفضل ملغ²⁺ التركيز لكل قالب وتمهيدي.

A-3 البوليميراز الحراري

■ كمية الإنزيم الزائدة - تقليل كمية الإنزيم بشكل مناسب على فترات 0.5 وحدة.

A-4 درجة حرارة التلدين

■ درجة حرارة التلدين منخفضة جدًا - - قم بزيادة درجة حرارة التلدين بشكل مناسب أو اعتماد طريقة التلدين ذات المرحلتين

دورات A-5 PCR

■ دورات PCR كثيرة جدًا —— قم بتقليل عدد دورات PCR.

س: عصابات غير مكتملة أو مسحة

أ -1 برايمر- خصوصية رديئة - إعادة تصميم التمهيدي ، وتغيير موضع وطول التمهيدي لتعزيز خصوصيته ؛ أو تنفيذ PCR متداخلة.

A-2 قالب DNA

—القالب ليس خالصًا —— قم بتنقية القالب أو استخرج الحمض النووي باستخدام مجموعات التنقية.

أ -3 ملغ²⁺ تركيز

—— إم جي²⁺ التركيز مرتفع للغاية - قلل Mg بشكل صحيح²⁺ التركيز: تحسين Mg²⁺ التركيز بسلسلة من التفاعلات من 1 مم إلى 3 مم بفاصل 0.5 ملي مولار لتحديد أفضل ملغ²⁺ التركيز لكل قالب وتمهيدي.

A-4 dNTP

—— تركيز dNTPs مرتفع للغاية —— تقليل تركيز dNTP بشكل مناسب

أ -5 درجة حرارة التلدين

—— درجة حرارة تلدين منخفضة للغاية —— زيادة درجة حرارة التلدين بشكل مناسب

دورات A-6

—— دورات كثيرة جدًا —— قم بتحسين رقم الدورة

س: ما مقدار قالب الحمض النووي الذي يجب إضافته في نظام تفاعل 50 ميكرولتر PCR؟

س: كيف تضخيم شظايا طويلة؟

الخطوة الأولى هي اختيار البوليميراز المناسب. لا يمكن تصحيح بوليميراز Taq العادي بسبب نقص نشاط نوكلياز خارجي 3'-5 '، وسيؤدي عدم التطابق إلى تقليل كفاءة التمديد للأجزاء بشكل كبير. لذلك ، لا يستطيع بوليميراز Taq العادي تضخيم الأجزاء المستهدفة التي يزيد حجمها عن 5 كيلو بايت بشكل فعال. يجب اختيار بوليميراز Taq مع تعديل خاص أو بوليميراز آخر عالي الدقة لتحسين كفاءة التمديد وتلبية احتياجات تضخيم الشظايا الطويلة. بالإضافة إلى ذلك ، يتطلب تضخيم الشظايا الطويلة أيضًا تعديلًا مطابقًا لتصميم التمهيدي ، ووقت التمسخ ، ووقت التمديد ، ودرجة الحموضة العازلة ، وما إلى ذلك. عادةً ، يمكن أن تؤدي البادئات ذات 18-24 زوج قاعدي إلى إنتاجية أفضل. من أجل منع تلف القالب ، يجب تقليل وقت التمسخ عند 94 درجة مئوية إلى 30 ثانية أو أقل لكل دورة ، ويجب أن يكون وقت رفع درجة الحرارة إلى 94 درجة مئوية قبل التضخيم أقل من دقيقة واحدة. علاوة على ذلك ، فإن ضبط درجة حرارة التمديد عند حوالي 68 درجة مئوية وتصميم وقت التمديد وفقًا لمعدل 1 كيلو بايت / دقيقة يمكن أن يضمن تضخيمًا فعالًا للشظايا الطويلة.

س: كيفية تحسين دقة التضخيم لـ PCR؟

يمكن تقليل معدل الخطأ لتضخيم PCR باستخدام بوليميرات DNA مختلفة بدقة عالية. من بين جميع بوليمرات Taq DNA الموجودة حتى الآن ، فإن إنزيم Pfu لديه أقل معدل خطأ وأعلى دقة (انظر الجدول المرفق). بالإضافة إلى اختيار الإنزيم ، يمكن للباحثين تقليل معدل طفرة تفاعل البوليميراز المتسلسل عن طريق تحسين ظروف التفاعل ، بما في ذلك تحسين تكوين المخزن المؤقت وتركيز البوليميراز الحراري وتحسين رقم دورة PCR.

اكتب رسالتك هنا وأرسلها إلينا