مجموعة Ultra HiFidelity PCR

دقة عالية وخصوصية عالية وخلط PCR جاهز لبدء التشغيل عالي الكفاءة.

Ultra HiFidelity PCR Kit عبارة عن مزيج جديد لتضخيم PCR عالي الدقة ومناسب للاستنساخ والكشف المتعلقين بـ PCR. يعد Ultra HiFi DNA Polymerase الموجود في المجموعة عبارة عن بوليميراز DNA جديد سريع وعالي الدقة تم تطويره بواسطة تقنية التطور الجزيئي الموجه. إنه يعزز تقارب بوليميريز الحمض النووي للقوالب ، ويحسن سرعة التضخيم وقدرة التمديد للإنزيم ، ويزيد من معدل نجاح PCR وإنتاجية المنتج.

قط. لا	حجم التعبئة
4992970	1 مل
4992971	5 * 1 مل
4992978	5 * 5 * 1 مل

أرسل بريدًا إلكترونيًا إلينا

تفاصيل المنتج

مثال تجريبي

التعليمات

علامات المنتج

سمات

■ سهل التشغيل: يتم توفير هذه المجموعة على شكل 2 × بريمكس ، ويمكن إجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل ببساطة عن طريق إضافة القوالب والبادئات.
■ دقة عالية: تبلغ الدقة 50 ضعف دقة بوليميراز Taq.
■ خصوصية عالية: أداء ممتاز لبدء التشغيل السريع لضمان خصوصية المنتج.
■ التضخيم السريع: يمكن أن تصل سرعة التمديد إلى 10-15 ثانية / كيلو بايت.
■ قابلية توسع قوية: يمكن تضخيم ما يصل إلى 20 كيلو بايت من شظايا الحمض النووي.
■ قابلية التطبيق الواسعة: تحتوي المجموعة على محسن PCR وهي مناسبة لتضخيم GC عالية والقوالب المعقدة.

تخصيص

النوع: بوليميراز DNA عالي الدقة
سرعة التضخيم: 10-15 ثانية / كيلو بايت
حجم الجزء: <20 كيلو بايت
التطبيقات: تضخيم PCR عالي الدقة ، استنساخ الجينات ، تضخيم قالب GC عالي الدقة ، استنساخ الجينات للجينومات المعقدة ، تضخيم عالي الدقة cDNA ، اكتشاف SNP ، طفرة خاصة بالموقع ، إلخ.
عائد استخراج الحمض النووي من أنسجة نباتية مختلفة:
ملاحظة: يعتمد إنتاجية الحمض النووي على أنواع العينات. جميع المواد المذكورة أعلاه من أوراق العطاء.

يمكن تخصيص جميع المنتجات لـ ODM / OEM. للتفاصيل،الرجاء النقر فوق خدمة مخصصة (ODM / OEM)

سابق: 2 × Pfu PCR Mix

التالي: طقم كوانتسكريبت RT

	بدء التشغيل السريع لضمان خصوصية المنتج الشكل 1. لدى Ultra HiFi وظيفة بدء التشغيل الساخن الممتازة لضمان خصوصية منتجات التضخيم. تم تطبيق طريقة المنارات الجزيئية (Ma et al.، Anal Biochem، 2006).
	دقة عالية ممتازة ، 50 مرة أعلى من Taq Polymerase الشكل 2. دقة Ultra HiFi أعلى بـ 50 مرة من دقة بوليميريز Taq الشائعة. يتم استخدام دقة البلمرة لـ Taq polymerase (بدون نشاط تصحيحي) كمرجع.
	يمكن تضخيم سريع وشظايا طويلة بسرعة الشكل 3. يمكن أن يمتد Ultra HiFi حتى 5 ثوانٍ / كيلو بايت للأجزاء الأصغر من 4 كيلو بايت. بالنسبة للأجزاء الطويلة ، يمكن تمديد وقت التضخيم بشكل مناسب. بالنسبة للأجزاء التي يزيد حجمها عن 15 كيلو بايت ، يمكن أن تصل سرعة النطاق إلى 30 ثانية / كيلو بايت. م: TIANGEN D15000 ماركر
	عالمية قوية وخصوصية عالية ، من السهل قراءة GC عالية وشظايا طويلة من مصادر مختلفة الشكل 4. يتميز Ultra HiFi بخصوصية عالية لضمان معدل نجاح التضخيم وكمية المنتج لأنواع مختلفة من القوالب. A. نتائج تضخيم Ultra HiFi B. نتائج تضخيم إنزيم Hi-Fi للمورد K. C. نتائج تضخيم إنزيم Hi-Fi للمورد N م: TIANGEN D15000 ماركر لين 1-5. نتائج تضخيم القوالب بأطوال مختلفة: 1. 750 زوج قاعدي ؛ 2. 1 كيلو بايت ؛ 3. 2 كيلو بايت 4. 4 كيلو بايت ؛ 5. 6 كيلو بايت المسار 6. نتيجة التضخيم لقالب GC المرتفع: 1915 نقطة أساس (GC٪: 70٪) ؛ لين 7-11. نتيجة تضخيم 2 كيلو بايت من قوالب الجينوم المختلفة: 7. الجرذ؛ 8. أرز؛ 9. القمح. 10. الذرة ؛ 11. البكتيريا. لين 12-14. نتيجة تضخيم الشظايا الطويلة 8 كيلو بايت: 12. أرز ؛ 13. الذرة ؛

س: لا نطاقات تضخيم

نموذج A-1

■ يحتوي القالب على شوائب بروتينية أو مثبطات Taq ، وما إلى ذلك - - تنقية قالب الحمض النووي ، وإزالة شوائب البروتين أو استخراج الحمض النووي باستخدام مجموعات التنقية.

■ لم يكتمل تمسخ القالب - - قم بزيادة درجة حرارة التمسخ بشكل مناسب وإطالة وقت التمسخ.

■ تدهور القالب - إعادة تجهيز القالب.

A-2 التمهيدي

■ نوعية رديئة من البرايمر - أعد تركيب البرايمر.

■ تحلل التمهيدي ——Aliquot الاشعال عالية التركيز إلى حجم صغير للحفظ. تجنب التجميد والذوبان المتكرر أو الاحتفاظ بالتبريد لمدة 4 درجات مئوية على المدى الطويل.

■ تصميم غير مناسب للبادئات (على سبيل المثال ، طول التمهيدي غير كافٍ ، يتكون ثنائي الطبقة بين البادئات ، وما إلى ذلك) - إعادة تصميم الاشعال (تجنب تشكيل ثنائي التمهيدي والبنية الثانوية)

أ -3 ملغ²⁺تركيز

■ ميغاغرام²⁺ تركيز منخفض للغاية - زيادة Mg بشكل صحيح²⁺التركيز: تحسين Mg²⁺ التركيز بسلسلة من التفاعلات من 1 مم إلى 3 مم بفاصل 0.5 ملي مولار لتحديد أفضل ملغ²⁺ التركيز لكل قالب وتمهيدي.

A-4 درجة حرارة التلدين

■ درجة حرارة التلدين المرتفعة تؤثر على ارتباط البرايمر والقالب. —— تقليل درجة حرارة التلدين وتحسين الحالة بتدرج 2 درجة مئوية.

A-5 تمديد الوقت

■ وقت تمديد قصير - - زيادة وقت التمديد.

س: خطأ إيجابي

الظواهر: تظهر العينات السلبية أيضًا نطاقات التسلسل المستهدفة.

A-1 تلوث PCR

■ التلوث المتبادل للتسلسل المستهدف أو منتجات التضخيم —— بحذر لا تقم بمص العينة التي تحتوي على تسلسل الهدف في العينة السلبية أو انسكابها خارج أنبوب جهاز الطرد المركزي. يجب تعقيم الكواشف أو المعدات للتخلص من الأحماض النووية الموجودة ، ويجب تحديد وجود التلوث من خلال تجارب التحكم السلبية.

■ كاشف التلوث - قصف الكواشف وتخزينها في درجة حرارة منخفضة.

A-2 رئيس الوزراءr

■ ميغاغرام²⁺ تركيز منخفض للغاية - زيادة Mg بشكل صحيح²⁺ التركيز: تحسين Mg²⁺ التركيز بسلسلة من التفاعلات من 1 مم إلى 3 مم بفاصل 0.5 ملي مولار لتحديد أفضل ملغ²⁺ التركيز لكل قالب وتمهيدي.

■ تصميم تمهيدي غير لائق ، والتسلسل المستهدف له تجانس مع التسلسل غير المستهدف. —— إعادة تصميم الاشعال.

س: التضخيم غير المحدد

الظواهر: نطاقات تضخيم PCR غير متوافقة مع الحجم المتوقع ، سواء كان كبيرًا أو صغيرًا ، أو في بعض الأحيان تحدث كل من نطاقات التضخيم المحددة ونطاقات التضخيم غير المحددة.

أ -1 برايمر

■ ضعف خصوصية البرايمر

—— إعادة التصميم التمهيدي.

■ تركيز التمهيدي مرتفع جدًا - - قم بزيادة درجة حرارة التمسخ بشكل صحيح وإطالة وقت التمسخ.

A-2 ملغ²⁺ تركيز

■ The Mg²⁺ التركيز مرتفع جدًا - قلل تركيز Mg2 + بشكل صحيح: قم بتحسين Mg²⁺ التركيز بسلسلة من التفاعلات من 1 مم إلى 3 مم بفاصل 0.5 ملي مولار لتحديد أفضل ملغ²⁺ التركيز لكل قالب وتمهيدي.

A-3 البوليميراز الحراري

■ كمية الإنزيم الزائدة - تقليل كمية الإنزيم بشكل مناسب على فترات 0.5 وحدة.

A-4 درجة حرارة التلدين

■ درجة حرارة التلدين منخفضة جدًا - - قم بزيادة درجة حرارة التلدين بشكل مناسب أو اعتماد طريقة التلدين ذات المرحلتين

دورات A-5 PCR

■ دورات PCR كثيرة جدًا —— قم بتقليل عدد دورات PCR.

س: عصابات غير مكتملة أو مسحة

أ -1 برايمر- خصوصية رديئة - إعادة تصميم التمهيدي ، وتغيير موضع وطول التمهيدي لتعزيز خصوصيته ؛ أو تنفيذ PCR متداخلة.

A-2 قالب DNA

—القالب ليس خالصًا —— قم بتنقية القالب أو استخرج الحمض النووي باستخدام مجموعات التنقية.

أ -3 ملغ²⁺ تركيز

—— إم جي²⁺ التركيز مرتفع للغاية - قلل Mg بشكل صحيح²⁺ التركيز: تحسين Mg²⁺ التركيز بسلسلة من التفاعلات من 1 مم إلى 3 مم بفاصل 0.5 ملي مولار لتحديد أفضل ملغ²⁺ التركيز لكل قالب وتمهيدي.

A-4 dNTP

—— تركيز dNTPs مرتفع للغاية —— تقليل تركيز dNTP بشكل مناسب

أ -5 درجة حرارة التلدين

—— درجة حرارة تلدين منخفضة للغاية —— زيادة درجة حرارة التلدين بشكل مناسب

دورات A-6

—— دورات كثيرة جدًا —— قم بتحسين رقم الدورة

س: ما مقدار قالب الحمض النووي الذي يجب إضافته في نظام تفاعل 50 ميكرولتر PCR؟

س: كيف تضخيم شظايا طويلة؟

الخطوة الأولى هي اختيار البوليميراز المناسب. لا يمكن تصحيح بوليميراز Taq العادي بسبب نقص نشاط نوكلياز خارجي 3'-5 '، وسيؤدي عدم التطابق إلى تقليل كفاءة التمديد للأجزاء بشكل كبير. لذلك ، لا يستطيع بوليميراز Taq العادي تضخيم الأجزاء المستهدفة التي يزيد حجمها عن 5 كيلو بايت بشكل فعال. يجب اختيار بوليميراز Taq مع تعديل خاص أو بوليميراز آخر عالي الدقة لتحسين كفاءة التمديد وتلبية احتياجات تضخيم الشظايا الطويلة. بالإضافة إلى ذلك ، يتطلب تضخيم الشظايا الطويلة أيضًا تعديلًا مطابقًا لتصميم التمهيدي ، ووقت التمسخ ، ووقت التمديد ، ودرجة الحموضة العازلة ، وما إلى ذلك. عادةً ، يمكن أن تؤدي البادئات ذات 18-24 زوج قاعدي إلى إنتاجية أفضل. من أجل منع تلف القالب ، يجب تقليل وقت التمسخ عند 94 درجة مئوية إلى 30 ثانية أو أقل لكل دورة ، ويجب أن يكون وقت رفع درجة الحرارة إلى 94 درجة مئوية قبل التضخيم أقل من دقيقة واحدة. علاوة على ذلك ، فإن ضبط درجة حرارة التمديد عند حوالي 68 درجة مئوية وتصميم وقت التمديد وفقًا لمعدل 1 كيلو بايت / دقيقة يمكن أن يضمن تضخيمًا فعالًا للشظايا الطويلة.

س: كيفية تحسين دقة التضخيم لـ PCR؟

يمكن تقليل معدل الخطأ لتضخيم PCR باستخدام بوليميرات DNA مختلفة بدقة عالية. من بين جميع بوليمرات Taq DNA الموجودة حتى الآن ، فإن إنزيم Pfu لديه أقل معدل خطأ وأعلى دقة (انظر الجدول المرفق). بالإضافة إلى اختيار الإنزيم ، يمكن للباحثين تقليل معدل طفرة تفاعل البوليميراز المتسلسل عن طريق تحسين ظروف التفاعل ، بما في ذلك تحسين تكوين المخزن المؤقت وتركيز البوليميراز الحراري وتحسين رقم دورة PCR.

اكتب رسالتك هنا وأرسلها إلينا