مجموعة الأنسجة المغناطيسية / الخلية / مجموع الحمض النووي الريبي الدموي

A-1 تحلل الخلايا أو التجانس غير كاف

---- تقليل استخدام العينة ، وزيادة كمية المخزن المؤقت للتحلل ، وزيادة وقت التجانس والتحلل.

A-2 كمية العينة كبيرة جدًا

---- تقليل كمية العينة المستخدمة أو زيادة كمية المخزن المؤقت للتحلل.

أ -1 عدم كفاية تحلل الخلية أو تجانسها

---- تقليل استخدام العينة ، وزيادة كمية المخزن المؤقت للتحلل ، وزيادة وقت التجانس والتحلل.

A-2 كمية العينة كبيرة جدًا

---- يرجى الرجوع إلى سعة المعالجة القصوى.

لا يُستخرج A-3 RNA بالكامل من العمود

---- بعد إضافة الماء الخالي من RNase ، اتركه لبضع دقائق قبل الطرد المركزي.

A-4 الإيثانول في eluent

---- بعد الشطف ، قم بالطرد المركزي مرة أخرى وقم بإزالة المخزن المؤقت للغسيل قدر الإمكان.

لا يتم إزالة وسط استنبات الخلية A-5 بالكامل

---- عند جمع الخلايا ، يرجى التأكد من إزالة وسط الثقافة قدر الإمكان.

A-6 لا يتم طرد الخلايا المخزنة في RNAstore بشكل فعال

---- كثافة RNAstore أكبر من متوسط ​​مستنبت الخلية ؛ لذلك يجب زيادة قوة الطرد المركزي. يقترح الطرد المركزي عند 3000x جم.

A-7 محتوى منخفض من الحمض النووي الريبي ووفرة في العينة

---- استخدم عينة إيجابية لتحديد ما إذا كان انخفاض العائد ناتجًا عن العينة.

A-1 المادة ليست طازجة

---- يجب تخزين الأنسجة الطازجة في النيتروجين السائل على الفور أو وضعها على الفور في كاشف RNAstore لضمان تأثير الاستخراج.

A-2 كمية العينة كبيرة جدًا

---- تقليل كمية العينة.

A-3 RNase التلوثn

---- على الرغم من أن المخزن المؤقت الموجود في المجموعة لا يحتوي على RNase ، فمن السهل تلويث RNase أثناء عملية الاستخراج ويجب التعامل معه بحذر.

أ -4 التلوث بالرحلان الكهربي

---- استبدل محلول الرحلان الكهربائي وتأكد من خلو المواد الاستهلاكية ومخزن التحميل من تلوث RNase.

أ -5 كثرة التحميل للرحلان الكهربي

---- تقليل كمية تحميل العينة ، يجب ألا يتجاوز تحميل كل بئر 2 ميكروغرام.

كمية العينة A-1 كبيرة جدًا

---- تقليل كمية العينة.

A-2 تحتوي بعض العينات على نسبة عالية من الحمض النووي ويمكن معالجتها بـ DNase.

---- إجراء معالجة RNase-Free DNase لمحلول RNA الذي تم الحصول عليه ، ويمكن استخدام RNA مباشرة للتجارب اللاحقة بعد العلاج ، أو يمكن تنقيته بشكل أكبر بواسطة مجموعات تنقية RNA.

بالنسبة للأواني الزجاجية ، تُخبز على حرارة 150 درجة مئوية لمدة 4 ساعات. بالنسبة للحاويات البلاستيكية ، تُغمر في 0.5 مولار هيدروكسيد الصوديوم لمدة 10 دقائق ، ثم تشطف جيدًا بالماء الخالي من RNase ثم تعقيمها لإزالة RNase تمامًا. يجب أن تكون الكواشف أو المحاليل المستخدمة في التجربة ، وخاصة الماء ، خالية من RNase. استخدم الماء الخالي من RNase لجميع مستحضرات الكاشف (أضف الماء إلى زجاجة زجاجية نظيفة ، وأضف DEPC إلى تركيز نهائي بنسبة 0.1٪ (V / V) ، ورجه طوال الليل والأوتوكلاف).